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如何利用高通量组织研磨仪提取植物DNA
发表日期:2017/11/28 来源:托普云农 浏览次数:542次

        DNA一直是生物学中重要研究对象,通过它的遗传特性也能为农业育种提供巨大帮助,今天小编就针对植物DNA的提取为大家做下介绍,其中着重讲一讲样品的研磨步骤:
        一、样品研磨
        1) 取1g的样品放入2ml样品管中;
        2) 加入1-2粒5mm研磨珠;
        3) 加入1ml的CTAB 抽提液;
        4) 将加有样品的样品管放入高通量组织研磨仪的适配器中,盖好;
        5) 将研磨转速调到1800,设定研磨时间为90秒(可根椐样品的研磨的难易程度来调节,此数据是以银杏为样本得出);
        6) 启动研磨仪对样品进行研磨(根据不同的样品,本身性质不同,需要对研磨频率和研磨时间进行适当的调整)。

高通量组织研磨仪


        二、DNA的粗提
        1) 将高通量组织研磨仪研磨好的样品取出于65℃水浴45min,中途间隔(轻柔)振荡三次混匀;
        2) 冷却后加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),轻柔颠倒混匀使乳化10min;
        3) 7000g-8000g离心10min(18-20℃);
        4) 吸取上清于另一干净的离心管中;
        5) (根据需要可用氯仿:异戊醇如上法重复抽提一次,吸取上清);
        6) 加入与上清液等体积(且已于-20℃预冷的异丙醇,颠倒混匀,约1至2分钟后应有白色絮状沉淀出现;
        7) 离心法沉淀DNA;
        8) 在75%乙醇中漂洗DNA数分钟以上,用Tip头吸干乙醇;
        9) 用1ml 75%乙醇再漂洗一次;
        10) 沉淀于室温或64℃以下的恒温箱中干燥片刻至刚出现半透明,不要过度干燥;
        11) 用50μlTE溶解沉淀,可用65℃水浴助溶,DNA粗提物可用于粗略PCR等。
        利用高通量组织研磨仪对要进行DNA提取的植物样品研磨的好处在于:研磨过程中,不会对植物组织造成破坏,可根据需要选择干磨、湿磨及冷冻研磨,封闭式的样品管,避免样品交叉污染。

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